Под «методом ферментного тестирования» подразумеваются различные методы, используемые для измерения и анализа ферментов в биологических образцах. Вот несколько обычно используемых методов:

1. Спектрофотометрические анализы. Эти методы используют изменение оптической плотности субстрата или продукта при определенных длинах волн для количественной оценки активности фермента. Примеры включают измерение производства или потребления цветного соединения.

2. Флуорометрические анализы. В этих анализах используются флуоресцентные молекулы, интенсивность флуоресценции которых изменяется при взаимодействии с ферментами. Флуоресценцию можно измерить для определения активности фермента.

3. Хроматографические методы: такие методы хроматографии, как высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) или газовая хроматография (ГХ), могут использоваться для разделения и количественного определения ферментных субстратов, продуктов или промежуточных продуктов реакции.

4. Методы электрофореза. Методы гель-электрофореза, такие как электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ), позволяют разделять ферменты в зависимости от их молекулярной массы или заряда. Активность фермента можно обнаружить с помощью специальных методов окрашивания.

5. Иммуноанализы. В иммуноферментных анализах (ИФА) используются специфические антитела для обнаружения и количественного определения ферментов в биологических образцах. Эти методы обладают высокой чувствительностью и широко используются в исследованиях и клинической диагностике.

6. Радиоизотопные анализы. Радиоактивные изотопы могут быть включены в субстраты или продукты ферментов, что позволяет проводить их количественную оценку путем измерения радиоактивности. Эти анализы очень чувствительны, но требуют особых мер безопасности.

7. Биохимическая кинетика: измеряя скорость реакций, катализируемых ферментами, при различных концентрациях субстрата, можно определить кинетические параметры, такие как константы Михаэлиса-Ментена (Km) и максимальную скорость (Vmax).

8. Методы молекулярной биологии: Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и другие методы молекулярной биологии могут использоваться для амплификации и обнаружения специфических генов, кодирующих ферменты, или транскриптов мРНК.

9. Подходы протеомики. Методы масс-спектрометрии позволяют идентифицировать и количественно определять ферменты путем анализа их пептидных фрагментов. Это позволяет проводить комплексное профилирование экспрессии ферментов в сложных биологических образцах.